标记基因的作用质粒上有两个或两个以上标记基因的作用是什么?未导入目的基因之前,质粒上已经有标记基因,那无论是否导入目的基因,用选择培养基筛选不是都有抗性吗,那还怎么区分重组
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/06 13:42:31
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标记基因的作用质粒上有两个或两个以上标记基因的作用是什么?未导入目的基因之前,质粒上已经有标记基因,那无论是否导入目的基因,用选择培养基筛选不是都有抗性吗,那还怎么区分重组
标记基因的作用质粒上有两个或两个以上标记基因的作用是什么?
未导入目的基因之前,质粒上已经有标记基因,那无论是否导入目的基因,用选择培养基筛选不是都有抗性吗,那还怎么区分重组质粒与普通质粒?
标记基因的作用质粒上有两个或两个以上标记基因的作用是什么?未导入目的基因之前,质粒上已经有标记基因,那无论是否导入目的基因,用选择培养基筛选不是都有抗性吗,那还怎么区分重组
质粒上有两个或两个以上标记基因是为了使用方便.而且两个标记基因的功能是不一样的.比如我们最常用的PUC18/19等,一个是氨苄抗性,另一个是LAC Z基因.
前一个基因的存在,让我们在培养时加入氨苄可以让细菌时刻把这个质粒带着,如果不加氨苄,细菌肯定会把这个质粒丢掉的(毕竟质粒相对于细胞来说是一个包袱,但当氨苄存在时,如果细菌把质粒丢了,细菌便不能抗氨苄而被杀死).
而LAC Z基因是为我们插入目的基因筛选而用的.LAC Z基因本身在IPTG和x-gal的作用下,而产生兰斑.而且这个基因上有很多的酶切位点,方便我们插入自己想要的基因.而我们的基因插入后,把LAC Z基因破坏了,不能产生兰斑.这就是兰白斑筛选.
区分重组质粒与普通质粒的方法有很多,比如利用α-互补原理进行蓝白斑筛选,利用插入失活原理进行双抗筛选,以及针对插入目的片段功能的底物筛选等。对于一般的质粒载体,则可随机挑取单菌落,采取菌落PCR、southern blot、质粒抽提及酶切等方法来判断是否重组质粒。...
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区分重组质粒与普通质粒的方法有很多,比如利用α-互补原理进行蓝白斑筛选,利用插入失活原理进行双抗筛选,以及针对插入目的片段功能的底物筛选等。对于一般的质粒载体,则可随机挑取单菌落,采取菌落PCR、southern blot、质粒抽提及酶切等方法来判断是否重组质粒。
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在插入位点两边设计引物PCR,看电泳条带大小,或者直接测序看是不是目标序列
或者双酶切,再电泳看看导入进去了没,质粒上应该有酶切位点的吧
检测标记基因,就是看一看质粒是不是已经转入了,在此基础上还要进行目的基因的检测,mRNA的检测和表达产物的检测,分别利用DNA分子杂交,DNA-RNA分子杂交,以及抗原抗体杂交
跟你简单的说吧
首先质粒是细菌拟核裸露DNA外的遗传物质,真核细胞是没有质粒的,目的基因先与质粒连接,经过一定的方法鉴定,一般是酶切、电泳,看目的基因是否与质粒连接上,将连接成功的重组质粒导入受体细胞,这里的受体细胞一般是真核细胞,如果带标记基因的重组质粒导入细胞了就可以用选择培养基筛选了。...
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跟你简单的说吧
首先质粒是细菌拟核裸露DNA外的遗传物质,真核细胞是没有质粒的,目的基因先与质粒连接,经过一定的方法鉴定,一般是酶切、电泳,看目的基因是否与质粒连接上,将连接成功的重组质粒导入受体细胞,这里的受体细胞一般是真核细胞,如果带标记基因的重组质粒导入细胞了就可以用选择培养基筛选了。
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